Hemoglobina A2

OBJETIVO

El objetivo de esta práctica es determinar la hemoglobina retenida por una resina de intercambio iónico.

FUNDAMENTO

Después de preparar un hemolizado, las hemoglobinas son retenidas por una resina de intercarnbio iónico. La hemoglobina A2 (HbA2) se eluye de forma específica bajo estrictas condiciones de pH y fuerza iónica, cuantificándose por lectura fotométrica a 415 nm.

MATERIALES

• Espectrofotómetro
• Pipetas graduadas
• Pipetas pasteur

PROCEDIMIENTO

• Preparación de el hemolizado:

1. Preparar en un tubo de ensayo 50 micro litros de sangre y 200 micro litros de agua destilada. Agitar, este hemolizado se uülizará en los pasos 3 y 7.

• Separación y lectura de ta HbA2 (Notas 1 y 2)

1. Destapar la parte superior de la Microcolumna, romper a continuación la lengüeta inferior y bajar el disco superior hasta el nivel de la resina, evitando comprimirla, con la ayuda del extremo plano de una pipeta. Dejar gotear hasta que el líquido alcance el nivel del disco, desechando el eluído.
2. Aplicar cuidadosamente sobre el disco superior: Hemolizado 50 micro litros y desechar el eluído.
3. Cuando haya penetrado todo el hemolizado añadir, procurando arrastrar los posibles restos del mismo: Reactivo (1) 200 micro litros y desechar el eluído.
4. Colocar la microcolumna sobre un tubo de ensayo y añadir: Reactivo (1) 3 mL y recoger el eluído (Fracción HbA2).
5. Agitar bien y leer la absorbancia de la fracción HbA2 a 415 nm frente a agua destilada.

•  Lectura de la hemoglobina total (HbTOTAL:

1. Pipetear en un tubo de ensayo: 12 mL de agua destilada y 50 micro litros de hemolizado.
2. Agitar bien y leer la absorbancia a 415 nm frente a agua destilada.
   

RESULTADOS

Para obtener los resultados despejaremos los datos obtenidos en la siguiente fórmula: