Técnicas de Análisis Hematológico

OBJETIVO  El objetivo de la práctica es realizar una tinción sanguínea por el método de  May Grünwald- Giemsa. FUNDAMENTO La tinción de  May Grünwald-Giemsa  es una de las tinciones policromas más utilizadas en hematología. Se basa en la combinación de dos colorantes que en solución acuosa se ionizan y se combinan con los distintos componentes celulares, según sus respectivas afinidades, generando sales insolubles con diferentes matices de coloración. MATERIALES Pipetas pasteur Frotis sanguíneos Barras paralelas y cristalizador Agua destilada Colorantes proporcionados por el kit PROCEDIMIENTO Colocamos la extensión sobre el cristalizador. Cubrimos la extensión con solución May Grünwald durante dos minutos (para fijarlo). Volcamos la extensión para eliminar el colorante y escurrimos. Cubrimos la extensión con solución diluida de May Grünwald durante un minuto. Volcamos la extensión para eliminar el colorante, lavamos con agua destilada y esc...

OBJETIVOS El objetivo de la práctica es realizar una tinción sanguínea por el método de Wright. FUNDAMENTOS El fundamento es el mismo que en las demás tinciones, solo que en este caso se usa un solo colorante. El colorante Wright es una mezcla de eosina, azul de metileno y derivados del azul de metileno en metanol. MATERIALES Portaobjetos Lancetas Toallitas con alcohol Vaso de precipitados Metanol Colorante Wright Acetona Papel Agua destilada Tubo de ensayo Paralelas Cristalizador Pipeta Pasteur PROCEDIMIENTO Preparamos un vaso con acetona y metanol (a partes iguales) y metemos los portas para desengrasarlos. Agitamos el colorante Wright para que no queden precipitados. Diluimos el colorante al 1/10 con agua destilada en un tubo de ensayo. Procedemos al pinchazo en el dedo con la lanceta (después de haber limpiado la zona) Hacemos la extensión con la técnica del portaobjetos en cuña. Dejamos secar el frotis al aire y ponemos el porta...

OBJETIVO El objetivo de esta práctica es aprender a realizar un frotis sanguíneo. FUNDAMENTOS Un frotis es un procedimiento por el que se observa bajo un microscopio una muestra de sangre para contar los distintos tipos de células sanguíneas que circulan (glóbulos rojos, glóbulos blancos, plaquetas, etc.) y para determinar si el aspecto de las células es anormal. MATERIALES Metanol Vaso de precipitado Papel Acetona Lancetas Toallita con alcohol Portaobjetos PROCEDIMIENTO Desengrasamos los portaobjetos con una solución de metanol y acetona, secamos con papel. Procedemos a la punción del dedo con una lanceta (previamente habiendo limpiado la zona con una toallita con alcohol) Depositamos una gota de sangre pequeña en el portaobjetos soporte, cerca de un extremo. Colocamos el portaobjetos extensor sobre el soporte, por delante de la gota de sangre, formando cuña en un ángulo de 45 grados. Deslizamos el portaobjetos extensor hacia atrás para que su borde entr...

OBJETIVOS El objetivo de la práctica es determinar el genotipo y fenotipo más probable. FUNDAMENTO Investigar el genotipo más probable del sistema Rh enfrentando los hematíes problema a distintos  sueros que contienen anticuerpos dirigidos contra los antígenos que componen el sistema Rh. El  genotipo  de una persona es su dotación genética en el cromosoma, y el  fenotipo  es la manifestación de ese genotipo.  MATERIALES SSF Gradilla Cubreobjetos Portaobjetos Parafilm Pipeta Pasteur Tubos para centrifuga REACTIVO Anti-D Anti-E Anti-C Anti-e Anti-c Autocontrol D Concentrado de hematíes PROCEDIMIENTO Realizamos un lavado (centrifugamos 5 minutos a 2500 rpm 3 veces) del concentrado de hematíes con una dilución al 5% de SSF. Depositamos en cada tubo 2-3 gotas de cada antisuero. Depositamos la misma cantidad de la suspensión de hematíes preparada en el paso 1 (2-3 gotas). Tapamos los tubos con parafilm y mezclamo...

Preparamos la muestra de sangre en un tubo de ensayo y lo colocamos en una gradilla. Con una pipeta pasteur colocamos una gota en el extremo del porta y realizamos una extensión por el método en cuña. Colocamos el frotis en el puente de tincion y lo cubrimos con metanol durante tres minutos, para deshidratar la muestra y se fije en el porta. En un tubo de ensayo limpio preparamos la tinción, con 0,2mL de Giemsa (azur-eosina-azul de metileno) con 2 mL de solución tampón. Con ayuda de una pipeta limpia, cubrimos la extensión con la giemsa y la dejamos actuar 25 minutos. Después escurrimos el exceso de tinción y enjuagamos la muestra hasta que deje de salir tinte. Lavamos con la solución tampón. Dejamos que escurra y que se seque. Ya podemos observar la preparación al microscopio, pero antes le colocamos un cubre objetos. Hay que tener cuidado con el chorro directamente 

OBJETIVO El objetivo de la práctica es la determinación del grupo sanguíneo y Rh con reactivos deshidratados. FUNDAMENTO Tiene el mismo fundamento que las pruebas en tubo y porta, solo que los reactivos están liofilizados en la tarjeta. La membrana celular de los glóbulos rojos contiene en su superficie diferentes proteínas, las cuales son las responsables de los diferentes tipos de sangre. Existen principalmente dos tipos de proteínas que determinan el tipo de sangre, la proteína A y la B. MATERIALES Muestra: Sangre Toallita con alcohol Eldonbag Lancetas SSF Pipeta Pasteur Sticks REACTIVOS PROCEDIMIENTOS Puncionamos el dedo con una lanceta (previamente habremos limpiado con una toallita la zona) Ponemos una gota de SSF en cada circulo (justo encima del reactivo). Añadimos una gota de sangre en cada circulo de la tarjeta. Mezclamos con un stick. Observamos los resultados.

OBJETIVO Determinar anticuerpos irregulares en suero. FUNDAMENTO Esta técnica es capaz de detectar la presencia de anticuerpos en suero de tipo IgG que reaccionan con antígenos en la superficie de los eritrocitos utilizando anticuerpos antiglobulina humana. MATERIALES Tubos de ensayo Muestra: Suero Micropipetas y puntas REACTIVOS Suspensión de hematíes 2% Antiglobulina humana Albúmina PROCEDIMIENTO PROTEICO: Pipeteamos en un tubo de ensayo 2 gotas de suero paciente y 2 gotas de suspensión de hematíes (con 2 gotas de albúmina). Incubamos a 37ºC durante 30 minutos. Centrifugamos 1 minuto a 1000 rpm. Si no hay anticuerpo hay que hacer el test de Coombs. SALINO: Ponemos en un tubo 2 gotas de suero y 2 gotas de suspensión de hematíes 2%. Incubamos a temperatura ambiente durante 30 minutos. Cetrifugamos 1 minuto a 1000 rpm. Si no hay anticuerpo hay que hacer el test de Coombs. TEST DE COOMBS Lavamos los hematíes, centrifugando 1 minuto a ...

OBJETIVO El objetivo de esta práctica es la confirmación del grupo ABO y Rh y verificar la presencia de anticcuerpos irregulares. FUNDAMENTO Para la confirmación del grupo sanguíneo ABO y Rh del receptor y para verificar la presencia de anticuerpos irregulares con la prueba de antiglobulina directa por medio de tres hematíes reactivos ID-DiaCell I-II-III. MATERIALES ID-card Pipeta automática y puntas Muestra: Suero Tubos REACTIVOS Concentrado de hematíes ID-DiaCell I-II-III ID-Diluent 2 ID-DiaCell B PROCEDIMIENTO Pipeteamos 0,5 mL de ID-Diluent 2 y 50 microlitros del concentrado de hematíes y mezclamos cuidadosamente. Retiramos la lamina de la ID-card conforme vamos pipeteando la muestra en los pocillos de la tarjeta. Pipeteamos 12 microlitros de la suspensión de hematíes preparada en el paso 1 a los microtubos 1, 2, 3. Pipeteamos 50 microlitros de ID-DiaCell I-II-III en los microtubos 4, 5 y 6. Agregamos 25 microlitros de suero en los microtubo...

OBJETIVO El objetivo de esta práctica es enfrentar los resultados del grupo hemático con los del grupo sérico a trevés de una ID-Card. FUNDAMENTO Los antisueros anti-A y anti-B son necesarios para demostrar la presencia o ausencia del antígeno A y B en hematíes humanos. La determinación de los grupos sanguíneos ABO requiere la realización de una contraprueba serológica o grupo inverso con plasma o suero para confirmar los resultados obtenidos en la prueba hemática. La tarjeta ID- Card ABO/D + Reverse grouping permite en una ID-Card determinar el grupo hemático y el grupo sérico para ABO, así como la determinación del antígeno RhD. MATERIALES ID-card Pipeta automática y puntas Muestra: Suero Tubos  REACTIVOS Concentrado de hematíes ID-DiaCell A1 ID-DiaCell B PROCEDIMIENTO Pipeteamos 0,5 mL de ID-Diluent 2 y 50 microlitros del concentrado de hematíes. Retiramos la lamina de la ID-card conforme vamos echando la muestra en los pocillos de ...

OBJETIVOS El objetivo es la determinación Celular de los Grupos Sanguíneos ABO y Rh. FUNDAMENTOS La membrana celular de los glóbulos rojos contiene en su superficie diferentes proteínas (antígenos), responsables de los diferentes grupos sanguíneos. Existen principalmente dos tipos de proteínas que determinan el tipo de sangre, la proteína A y la B. El Rh es otra proteína que si está presente en la superficie del glóbulo rojo será rh positivo y si está ausente,es rh negativo. De esta forma una persona debe de tener un grupo sanguíneo formado por la proteína A, B ó las dos y además será Rh positivo o negativo. MATERIALES Parafilm Pipeta Pasteur Suero salino fisiológico Tubos  REACTIVOS Anti-A Anti-B Anti-AB Anti-D Autocontrol Rh Concentrado de hematíes PROCEDIMIENTO Atemperamos los reactivos. Ponemos en un tubo 0,5 mL de concentrado de hematíes y llenamos con suero salino fisiológico. Tapamos con parafilm y centrifugamos 5 min...

OBJETIVO El objetivo de la práctica es la determinación de la p rueba sérica o indirecta. FUNDAMENTO El suero o plasma de un individuo solo debe contener anticuerpos frente a los antígenos que no están presentes en sus propios hematíes. Por ello, al hacer reaccionar este suero con hematíes tipados de cada grupo, solo producirá aglutinación en el caso de ser enfrentado a eritrocitos con Ag distinto a los de  sus propios hematíes. Se realiza esta prueba para determinarlo. MATERIALES Muestra: Suero Tubos eppendorff Pipeta automática y puntas REACTIVOS Suspensión 2% de hematíes A1 Suspensión 2% de hematíes B PREOCEDIMIENTO Atemperamos el suero. Inactivamos el suero en el baño maría a 56 grados durante 15 minutos. Ponemos 50 microlitros de suero en un eppendorff y 50 microlitros de suspensión de hematíes A1. Ponemos en otro tubo eppendorff 50 microlitros de suero y otros 50 de suspensión de hematíes B. Centrifugamos 2 minutos a 1000 rpm. Agitamos y le da...

OBJETIVOS Determinar los grupos sanguíneos del sistema ABO, Rh y observansdo macroscopicamente y microscopicamente la presencia o ausencia de aglutinación FUNDAMENTOS La técnica esta basada en la detección del antígeno D y los antígenos del grupo ABO sobre la superficie de los hematíes problema,empleando como reactivo un suero monoclonal humano que contiene anticuerpos anti-D, anti-B, anti-A, anti-AB. En el caso de que contengan dichos antígenos se observará una aglutinación a simple vista y microscopicamente. MATERIALES Gradilla Suero salino fisiológico Parafilm Tubo de hemólisis Tubos pequeños Pipetas pasteur Dispensador de suero fisiológico Micropipeta y puntas Centrífuga Visualizador Portaobjetod Cubre objetos, portaobjetos y microscopio REACTIVOS   Anti-D, anti-B, anti-A, anti-AB  Autocontrol Rh Sangre coagulada PROCEDIMIENTO  En un tubo de hemólisis ponemos 0....

OBJETIVO  El objetivo de la práctica es realizar un frotis sanguíneo y teñirlo por el método de panóptico rápido. FUNDAMENTO Consigue menos resolución de las estructuras celulares que la tinción de May-Grünwald-Giemsa y la tinción de Wright . Pero su elaboración es más rápida y más sencilla. Hay que tener en cuenta que se trata de una tinción diferencial que no reúne los requisitos para ser considerada tinción tipo Romanowsky. MATERIALES Lancetas Portaobjetos Agua destilada Puente Cubeta de tinción Capilares Toallitas desinfectantes Muestra: sangre capilar REACTIVOS Fijador verde  Eosina roja (colorante ácido) Azul de metileno (colorante básico) PROCEDIMIENTO Desinfectamos el dedo que vamos a puncionar con la lanceta. Llenamos el máximo de capilares posibles, desechando la primera gota. Elaboramos un frotis, por el método de portaobjetos en cuña. Ahora procedemos a teñir, por lo que preparamos las cubetas, la primera contendrá la sol...