Determinación del Grupo ABO en Portaobjetos

OBJETIVOS

Determinar los grupos sanguíneos del sistema ABO, Rh y observansdo macroscopicamente y microscopicamente la presencia o ausencia de aglutinación

FUNDAMENTOS

La técnica esta basada en la detección del antígeno D y los antígenos del grupo ABO sobre la superficie de los hematíes problema,empleando como reactivo un suero monoclonal humano que contiene anticuerpos anti-D, anti-B, anti-A, anti-AB.

En el caso de que contengan dichos antígenos se observará una aglutinación a simple vista y microscopicamente.

MATERIALES

• Gradilla
• Suero salino fisiológico
• Parafilm
• Tubo de hemólisis
• Tubos pequeños
• Pipetas pasteur
• Dispensador de suero fisiológico
• Micropipeta y puntas
• Centrífuga
• Visualizador
• Portaobjetod
• Cubre objetos, portaobjetos y microscopio

REACTIVOS 

•  Anti-D, anti-B, anti-A, anti-AB 
• Autocontrol Rh
• Sangre coagulada

PROCEDIMIENTO

1.  En un tubo de hemólisis ponemos 0.5mL de sangre problema y llenamos lo sobrante del tubo con suero salino fisiológico para lavar los hematíes.
2. Tapamos con parafilm y agitamos para que se mezcla bien la sangre con el suero fisiológico.
3. Centrifugamos durante 5 minutos a 2500 rpm, extraemos el sobrenadante.
4. Repetimos el paso 2 y 3 dos veces.
5. Una vez extraido el último sobrenadantec cogemos 100 μL del concentrado de hematíes y lo depositamos en un tubo pequeño y le añadimos 1.9mL de suero salino fisológico.
6. Rotulamos cinco tubos con A, B, AB, CD.
7. Depositamos en cada tubo 3 gotas de suspensión de hematíes y añadimos los reactivos correspondientes a cada tubo.
8.  Agitamos para que los reactivos se mezclen bien con los hematíes y esoeramos unos minutos para que se formen las reacciones de aglutinacion

OBSERVACIONES

Es muy importante llevar a cabo un buen lavado para que no se produzcan interferencias y se emitan resultados erróneos.