Resistencia Osmótica Eritrocitaria

OBJETIVO

El objetivo es determinar la resistencia osmótica de los eritrocitos problema.

FUNDAMENTO

Someter a los hematíes a una serie de soluciones salinas hipotónicas de concentración creciente determinando, a el grado de hemólisis en cada una de ellas. En condiciones normales, y empleando sangre sin incubar, la hemólisis se inicia a la concentración de NaC1 de 55 g/L y es prácficamente total a la de 3 g/L.

Esta prueba, aunque muy útil puede verse influida por diversos factores que a veces dificultan su destacando reticulocitosis y la eventual coexistencia de hipocromía.

MATERIALES

PROCEDIMIENTO

1. Cogemos sangre recién extraída que incubamos durante 24 horas a 37ºC.
2. En una gradilla colocamos 10 tubos de 5 ml (numerados del al 10) y vamos añadiendo agua destilada y solución salina en las siguientes proporciones:
   
3. A continuación agregamos a cada tubo 0.1 mL de sangre total heparinizada y homogeneizada previamente con varios movimientos suaves. No utilizar nunca como anticoagulante: Citrato, oxalato o EDTA, ya que puede ser causa de falsos resultados por aporte suplementario de iones.
4. Tapamos y movemos suavemente cada uno de los tubos, el mismo número de veces y con la misma intensidad. Moverlos con brusquedad produciría una hemólisis que podría falsear el resultado.
5. Dejamos en reposo durante 30 minutos a temperatura ambiente. Pasado el tiempo volvemos a agitar suavemente los tubos.
6. Cenfrifugamos todos los tubos a 3.500 r.p.m durante 5 minutos.
7. Encendemos el espectrofotómetro y ajustamos la longitud de onda en 540 nm.
8. Preparamos en una gradilla 10 tubos de 10 mL numerados del 1 al 10 y encada uno de ellos añadimos 5 mL de agua.
9. Sacamos los tubos de la centrífuga y los colocamos cada uno detrás del que le corresponde numericamente, del sobrenadante sacamos 0.2 mL y lo añadimos a cada uno de los correspondientes tubos con agua. Agitamos suavemente.
10. En las cubetas de la lectura añadimos 2 mL de cada uno de los tubos y procedemos a su lectura coloriméfrica. En el tubo 1 será el 0 % y el tubo 10 será el 100%. de hemólisis. Anotaremos ordenadamente las lecturas de cada uno de los tubos.

RESULTADOS

Una vez tenemos la absorbancia de cada tubo, el tubo de mayor absorbancia representará el 100% de hemólisis, entonces calculamos el % de los demás tubos y los enfrentamos a su correspondiente absorbancia.