Recuento de Plaquetas en Sangre Periférica

OBJETIVO

El objetivo de esta práctica es llevar a cabo un recuento de plaquetas a través de la cámara de neubauer (método directo) y sin cámara, a través de un frotis (método indirecto o de Fonio).

MÉTODO DIRECTO

FUNDAMENTO

A través de este método se lleva a cabo un recuento de plaquetas mediante una cámara de Neubauer, para ello se utliza sangre total que es diluida y hemolizada, en este caso por oxalato de amónico, que impide la agregación de las plaquetas y a su vez aumenta la refringencia para a continuación realizar un recuento al microscopio.

MATERIAL

• Sangre capilar
• Cámara de neubauer 
• Micropipeta y puntas
• Oxalato amónico
  
• Cámara huméda (placa petri y papel de filtro empapado)

PROCEDIMIENTO

1. En el tubo que viene preparado con el oxalato amónico para echarle 20 μL de sangre, resuspendemos en 2 mL de oxalato.

2. Llenamos la cámara de neubauer.

3. Esperamos 15-20 minutos con la cámara de neubauer dentro de la cámara húmeda.

4. Ponemos la cámara en el microscopio y enfocamos hasta 40x.

5. Para el recuento elegimos un cuadro grande de la cámara, de tal forma que contaremos en total 16 cuadritos, que equivale a un volumen de 0.1  mm³.

6. Una vez hayamos contado las plaquetas de los cuadros hacemos la media total de plaquetas, dado que 0.1mm³ es el volumen de cada cuadro grande (algo a tener en cuenta al hacer los cálculos si hemos contado más de un cuadro, en cuyo caso habrá que multiplicarlo por el número de cuadros) y 1 mm³ es el volumen de la cámara en total, podemos traducir estas relaciones en la siguiente fórmula:

OBSERVACIONES

Para favorecer la refringencia y que el conteo nos resulte más sencillo se debe poner el condensador bajo.

Con respecto a los resultados en nuestro caso se contó un cuadro de la cámara y posteriormente se hizo la media (23 plaquetas), después se aplicó la fórmula y se obtuvo un resultado de 230, el cual se multiplicó por la dilución (1/1000): el total de plaquetas fue de 230.000/mm3.

MÉTODO INDIRECTO

FUNDAMENTO

Connsiste en la determinación del número de plaquetas en un determinado volumen de sangre, esto se hace a través de la observación de un frotis teñido, por lo tanto, también nos permite observar la morfología.

MATERIAL

El material va a depender de si la preparación a observar la tenemos ya hecha o no, en el caso de que no los materiales van a ser los mismos que para realizar un frotis sanguíneo y una tinción.

PROCEDIMIENTO

1. Preparar un frotis de sangre capilar y teñirlo en caso de no tenerlo preparado.

2. Observar el frotis al microscopio con el objetivo de 100x